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                人γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫试剂盒说明书
                作者:江苏镇江厚普生物科技有限公司  来源:酶免试剂部  发表时间:[2013-7-12]  点击:2426

                本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量。

                实验原理:

                本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加︼入γ干扰素(IFN-γ),再与HRP标记的羊抗人受体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转々化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和∩样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中γ干扰素(IFN-γ)浓度。

                试剂盒组成

                试剂盒组成

                96孔配置

                保存

                说明书

                1

                封板膜

                2片(96

                密封袋

                1

                酶标包被板

                1×96

                2-8℃保存

                标准品:540ng/L

                0.5ml×1

                2-8℃保存

                标准ㄨ品稀释液

                1.5ml×1

                2-8℃保存

                酶标试剂

                6 ml×1

                2-8℃保存

                样品稀「释液

                6 ml×1

                2-8℃保存

                显色剂A

                6 ml×1

                2-8℃保存

                显色剂B

                6 ml×1

                2-8℃保存

                终止液

                6ml×1

                2-8℃保存

                浓缩洗涤液

                20ml×30倍)×1

                2-8℃保存

                样本处理及要求

                1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上♂清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

                2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如↙有沉淀形成,应该再次离心。

                3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

                4. 细胞∑培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细㊣ 胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

                5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后☉一份待检测,其余冷冻备用。

                6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马※上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

                7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的▓(HRP)活性。

                需要而未提供的试剂和器材:

                1.  37℃恒温箱

                2.  标准规格酶标仪

                3.  精密移液器及一次性吸头

                4.  蒸馏水

                5.  一次性试管

                6.  吸水纸

                操作步骤:

                1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品Ψ 孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准★品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标←准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别』取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为360ng/L, 240ng/L, 120ng/L, 60ng/L, 30ng/L)。

                2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻▆晃动混匀。

                3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

                4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

                5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

                6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

                7.         温育:操作同3

                8.         洗涤:操作同5

                9.         显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再√加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

                10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

                11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止★液后15分钟以内进行。

                注意事项:

                1.  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

                2.  浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

                3.  各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

                4.  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

                5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                6.  底物请避光保存。

                7.  严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

                8.  所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

                9.  本试剂不同批号组分不得混用。

                10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

                文本框:

                 

                计算:

                以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,   

                在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD     

                值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释     

                倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标     

                准曲线的直线回归方程式,将样品的OD     

                代入方程式,计算出样品浓◥度,再乘以稀释     

                倍数,即为样品的实际浓度。                 

                 

                                                             

                (此图仅供参考)

                试剂盒性能:

                1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

                2.批内与批间应∮分别小于9%11%

                检测范围:                                              

                20ng/L-480ng/L

                                           

                保存条件及有效期:

                1. 试剂盒保存2-8℃

                2. 有效期:6个月

                 

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